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Y190感受态细胞居品讲明
基因型
MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1
UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ
● 居品讲明
Y190 菌株是 Clontech 公司建树的 GAL4 系统酵母双杂现实用菌株,MATa 型,可平直更始质粒或与 MATα 型酵母菌株 Y187通过 mating 操作进行卵白互作考据或筛库老师。Transformation marker 为:trp1,leu2,cyh2;敷陈基因为:lacZ,HIS3,MEL1。Y190-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:(pGB 和 pACT2)或(pGBKT7 和 pGADT7)。质粒 pGB 由 pGBKT7纠正而来,筛选标志为 TRP1,用于抒发 DNA-BD(来自酵母转录因子 GAL4N 端 1~ 174 位氨基酸)与方针卵白(Bait)的和会卵白;质粒 ACT2 与 pGADT7 的结构和功能一样,筛选标志为 LEU,用于抒发 AD(GAL4 C 端 768~881 位氨基酸)与方针卵白(Prey)的和会卵白。GAL4 系统旨趣:一个好意思满的酵母转录因子 AL4 可分为功能上相互零丁的两个结构域:位于 N 端 1~174位氨基酸区段的 DNA 蚁集域 (DNA-BD)和位于 C 端 768~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD 巧合识别 GAL4-responsive gene 的上游激活序列 UAS,并与之蚁集。而 AD 不错开动 UAS 下贱的基因进行转录。BD 和 AD 单独存在不成激活转录,但当二者接近时,则呈现好意思满的 GAL4 活性,使含有 UAS 的开动子下贱基因转录抒发。宽泛要求下,BD 不与 AD 蚁集,将要检测的卵白质差别与 BD 和 AD 和会,酿成 bait 和会卵白(bait –BD)和 prey 和会卵白 (prey-AD),要是 bait 和 prey发生相互作用,就会促使 BD 和 AD 的相互接近,酿成好意思满的 GAL4,从而激活敷陈基因的转录。Y190 感受态细胞经额外工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7 质粒检测更始轨则>104 cfu/μg DNA。
● 操作措施
1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热惩处使其变性为单链情景,法子如下:Carrier DNA 放 95℃水浴或金属浴 3 min,快速插入冰中,静置 3 min,再次放 95℃水浴或金属浴 3 min,快速插入冰中,静置 3 min 以上。
2. 取 100 µl 冰上溶解的 Y190 感受态细胞,秩序加入预冷的见地质粒 0.5-3 µg,Carrier DNA10 µl,PEG/LiAc 500 µl 并吸打几次混匀,30℃水浴 30 min (15 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3. 将管放 42℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
4. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s 弃上清。
5. ddH2O 50 µl 重悬,涂板波多野结衣番号,29℃培养 48-96 h。 MZ8010 pGL4.27[luc2P minP Hygro] 询价 哺乳细胞 开动子 空载体 MZ8011 pECMV-Casp1-m-FLAG 询价 哺乳细胞 基因CDS 小鼠 MZ8012 pCMV-LifeAct-TagGFP2 询价 哺乳细胞 基因CDS MZ8013 pFUSE-CHIg-hG4 询价 哺乳细胞 MZ8014 pCDNA3.0-FLAG-Casp1-m 询价 哺乳细胞 基因CDS 小鼠 MZ8015 pEnCMV-3×FLAG-MCS 询价 哺乳细胞 基因CDS 空载体 MZ8016 pCMV-SPORT6-VEGFC 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8017 pCDNA3.1-YAP1-3×FLAG 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8018 pET28a-PARK7-10×Glu(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8019 pHIV-dTomato 询价 慢病毒 基因CDS MZ8020 pLVX-Grk6-m-FLAG-Puro 询价 哺乳细胞 基因CDS 小鼠 MZ8021 pBT3-SUC 询价 酵母菌 MZ8022 pCR4-TOPO-SELENOV 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8023 pDNR-LIB-IREB2(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8024 pCR4-TOPO-GRIN2A 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8025 pOTB7-SNCA(3同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8026 pOTB7-USP47 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8027 pOTB7-PDPN 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8028 pOTB7-H2AFV 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8029 pDNR-LIB-POLD4 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8030 pXR001-EF1a-CasRx-2A-EGFP 询价 哺乳细胞 MZ8031 xCas9(3.7)-BE4 询价 哺乳细胞 MZ8032 pCMV-SPORT6-NAA38 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8033 pCMV-SPORT6-CDH1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8034 pCDNA3.1-IGLON5 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8035 pBABE-HA-ER-IPpoI 询价 逆病毒 基因CDS MZ8036 pCDH-CMV-efemp1-m-EF1-CopGFP-T2A-Puro 询价 慢病毒 基因CDS 小鼠 MZ8037 pCMV-SPORT6-CSF2 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8038 pXR003: CasRx gRNA cloning backbone 询价 哺乳细胞 MZ8039 pDNR-LIB-RPL7L1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8040 pC0075 TtCsm6 His6-TwinStrep-SUMO-BsaI 询价 大肠杆菌 MZ8041 p2CT-His-MBP-Lba_Cas13a_WT 询价 大肠杆菌 MZ8042 pCDNA3β-FLAG-CBP-HA 询价 哺乳细胞 基因CDS 小鼠 MZ8043 pC0061 PsmCas13 (B05) His6-TwinStrep-SUMO-BsaI 询价 大肠杆菌 MZ8044 RCAS GFP (CT#22) 询价 广宿主 MZ8045 RAB11A-GFP HDRT Source (pTR 143) 询价 哺乳细胞 MZ8046 pMSCV-Zeocin 询价 逆病毒 基因CDS 空载体 MZ8047 pBbA5c-MevT(CO)-T1-MBIS(CO ispA)金黄葡萄球 询价 金黄色葡萄球菌 MZ8048 pCSN067 询价 酵母菌 MZ8049 pC0073 EiCsm6 His6-TwinStrep-SUMO-BsaI 询价 大肠杆菌 MZ8050 pGL4.37[luc2P ARE Hygro] 询价 哺乳细胞 开动子 MZ8051 pECMV-3×FLAG-HGFR 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8052 pCS2-PKM2-3×FLAG 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8053 pYL91 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8054 pOTB7-OLFM1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8055 pPCR-Script Amp SK(+)-IFNB1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8056 pLVX-HCAR1shRNA1-EGFP(2A)Puro 询价 哺乳细胞 shRNA 东谈主 MZ8057 pHIV-Luciferase 询价 慢病毒 基因CDS MZ8058 EGFP-Rab7A Q67L 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8059 pBlueScriptR-C4orf36 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8060 pBlueScriptR-PPFIBP2 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8061 pBlueScriptR-SYCP1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8062 pBlueScriptR-EPB41L5 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8063 pBlueScriptR-CDC14C(1点突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8064 pBlueScriptR-TRIM45(1点突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8065 pBlueScriptR-NEDD1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8066 pBlueScriptR-FAM71B 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8067 pBlueScriptR-ELAVL2 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8068 pBlueScriptR-HSPA1L 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8069 pCMV-SPORT6-PLB1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8070 pDNR-Dual-GPR81 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8071 pBlueScriptR-DUSP28 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8072 pCR4-TOPO-IREB2 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8073 pTOPO-PSEN1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8074 pCR-XL-TOPO-CDH1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8075 pBlueScriptR-ADGRE1(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8076 pCMV-SPORT6 .ccdb-STAMBPL1(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8077 pOTB7-CSF2RA 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8078 pOTB7-CSF2RA 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8079 pBlueScriptR-CSF2RB 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8080 pBlueScriptR-SNCAIP(1点突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8081 pCMV-SPORT6-RPS6KB1 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8082 pCR-BluntII-TOPO-KIF13A(4同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8083 pCR4-TOPO-ACSF2(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8084 pCR4-TOPO-KCNK10 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8085 pCR-XL-TOPO-IGSF3 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8086 pCR4-TOPO-KCNK15 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8087 pCR4-TOPO-KCNK13 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8088 pCR4-TOPO-KCNK9 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8089 pOTB7-KCNK6 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8090 pCR-Blunt II-TOPO-MAPT 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8091 pOTB7-IRX2 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8092 pOTB7-VCY1B 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8093 pDNR-LIB-FBLN5(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8094 pCDNA3-PTK7-VSV 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8095 pCR4-TOPO-IRF7(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8096 pCR-BluntII-TOPO-OTUD4 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8097 pOTB7-ACSF2(1同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8098 pBlueScriptR-MMP15(2同义突变) 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8099 pCMV-SPORT6.ccdb-Tecr-r 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8100 pOTB7-NPM3 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8101 pExpress-Abcf2-r 询价 大肠杆菌 基因CDS 大鼠 MZ8102 pExpress-Tmeff1-r 询价 大肠杆菌 基因CDS 大鼠 MZ8103 psiCHECK2-ICAM-1-3'UTR 询价 哺乳细胞 UTR 东谈主 MZ8104 pDsRed1-Kras-m-5×Phe 询价 哺乳细胞 基因CDS 小鼠 MZ8105 pET28a-(-30)GFP-PARK7 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主 MZ8106 pEGFP-C19orf12 询价 哺乳细胞 基因CDS 东谈主 MZ8107 pExpress-Csnk2b-r 询价 大肠杆菌 基因CDS 大鼠 MZ8108 pExpress-Haus1-r 询价 大肠杆菌 基因CDS 大鼠 MZ8109 pDNR-LIB-IYD 询价 大肠杆菌 基因CDS 东谈主